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質(zhì)粒抽提（Plasmid Extraction）方法即去除 RNA，將質(zhì)粒與細(xì)菌基因組 DNA分開，去除蛋白質(zhì)及其它雜質(zhì)，以得到相對(duì)純凈的質(zhì)粒。提取質(zhì)粒DNA的方法有很多種，從提取產(chǎn)量上分可分為微量提取、中量提取、大量提取，從使用儀器上分可分為一般提取和試劑盒方法提取，從具體操作方法分可以分為堿裂解法、煮沸法、牙簽法等，各種不同的方法各有其優(yōu)缺點(diǎn)，根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康目梢圆捎煤线m的提取方法。
Ⅰ.使用質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒時(shí)請(qǐng)參考具體試劑盒的操作說(shuō)明。如Omega公司的E.Z.N.A.® Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin (質(zhì)粒提取盒)。
Ⅱ.堿裂解手提法:此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取，提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴(kuò)增、銀染序列分析。方法如下:
1、接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細(xì)胞于2mlLB培養(yǎng)基。
2、37℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。
3、取1.5ml菌體于Ep管(離心管)，以4000rpm離心3min，棄上清液。
4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖，50mM/LEDTApH8.0，25mM/LTris-HClpH8.0)充分混合。
5、加入0.2ml溶液II(0.2mM/LNaOH，1%SDS)，輕輕翻轉(zhuǎn)混勻，置于冰浴5min.
6、加入0.15m1預(yù)冷溶液III(5mol/LKAc，pH4.8)，輕輕翻轉(zhuǎn)混勻，置于冰浴5min.
7、以10，000rpm離心20min，取上清液于另一新Ep管
8、加入等體積的異丙醇，混勻后靜置10min.
9、以10，000rpm離心20min，棄上清。
10、用70%乙醇0.5ml洗滌一次，抽干所有液體。
11、待沉淀干燥后，溶于50ulTE緩沖液中(或60℃溫育去離子水)
