RT-PCR試劑盒的使用方法及使用注意事項介紹
點擊次數(shù)：842 更新時間：2020-07-09
RT-PCR試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被樣本抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的樣本呈正相關。
RT-PCR試劑盒的使用首先應平衡至室溫（20-25°C ）再試驗（ 取出所需反應板）
1. 加入50ul標準品、血清標本于相應反應板孔中。
2. 每孔加入100ul酶聯(lián)物，輕輕混勻30秒(重要)，室溫60分鐘。
3. 洗板：甩盡板內(nèi)液體，用蒸餾水或者洗滌液（普通洗滌液，自配）洗滌反應板，并去除
水滴（在厚疊吸水紙上拍干）；這樣反復洗滌5次。
4. 每孔加入100ul顯色液， 輕輕混勻10秒，室溫20分鐘。
5. 每孔加入50ul終止液。輕輕混勻30秒；30分鐘內(nèi)在450nm處讀OD值。
以OD值為縱坐標，以標準品濃度為橫坐標，繪制標準曲線。根據(jù)血清樣品的OD值可在標準曲線上查出其濃度。
下面要為您介紹的是RT-PCR試劑盒的注意事項：
1、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時。
2、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
3、凍結(jié)標本溶解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛混合，不要在混勻器上強烈震蕩。
4、酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
5、渾濁或有沉淀的標本應先離心或過濾，澄清后再檢測。
6、標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應。保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。
7、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
8、反復凍融會使蛋白效價降低，所以代測樣本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。
